進口ELISA試劑盒實驗決竅總結(jié)
1)進口ELISA試劑盒用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
2)ELISA試劑盒實驗洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
3)用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
4)每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
5)要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其量程和量程進行確定。
6)在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
7)吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
8)將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，進口ELISA試劑盒可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
9)實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。
10)液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
11)由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
12)手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
13)檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
14)底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
15)孵育的時間應(yīng)該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準(zhǔn)。
16)對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
17沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
18)加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
19)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
20)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
21)合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
22)洗液不夠時，進口ELISA試劑盒可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。