① TSZelisa試劑盒樣品/標準品不正確稀釋。
② 孵育時間/溫度不正確。
③ 在孵育時為蓋上酶聯板覆蓋物：在孵育時需蓋上酶聯板覆蓋物，以防止液體蒸發或孵育期間的污染。每個試劑盒內均有足夠數量的酶聯板覆蓋物。
④ 檢測波長不正確：要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。
⑤ TMB底物的顯色時間過長：請監控顯色時間。說明書中所示的顯色時間可能因為溫度和其它檢測條件的不同而稍有變化。
⑥ 樣品不適合此檢測：在TSZelisa試劑盒說明書中會列出每種產品的適用標本范圍，超出范圍的標本可能不適于此試劑盒或者檢測條件需要摸索。
⑦ 樣品/標準品污染：樣品或標準品的污染可能會導致檢測結果“溢值”。
⑧ 偶合試劑不正確稀釋：要嚴格按照說明書來稀釋偶合試劑，濃度過高會造成OD的“溢值”HRP偶合試劑的不正確稀釋
⑨ 所用稀釋液不對：只能使用相應試劑盒內的稀釋液稀釋樣品和標準品。
找到問題原因后，解決問題就容易的多了。各位廣大科研者們也是一樣，在檢測的時候一定要認真仔細，并嚴格按照要求來操作。實驗前，對TSZelisa試劑盒說明書仔細的閱讀。