在繼續(xù)探討MKN-45細(xì)胞，這一人低分化胃癌細(xì)胞系的操作步驟時(shí)，我們不得不強(qiáng)調(diào)其培養(yǎng)環(huán)境的精細(xì)調(diào)控對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果的至關(guān)重要性。首先，確保培養(yǎng)基的配方精確無(wú)誤，通常MKN-45細(xì)胞使用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，這有助于提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分和生長(zhǎng)因子。

     接下來(lái)，細(xì)胞的傳代操作需謹(jǐn)慎進(jìn)行。在無(wú)菌條件下，移除舊培養(yǎng)基，用預(yù)溫的PBS輕輕洗滌細(xì)胞一至兩次，以去除殘留的培養(yǎng)基和死細(xì)胞。隨后，加入適量含EDTA的進(jìn)行消化，消化時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞貼壁情況靈活調(diào)整，避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。待細(xì)胞邊緣開(kāi)始變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶使細(xì)胞脫落，加入適量新鮮培養(yǎng)基終止消化，并通過(guò)移液管輕柔吹打形成單細(xì)胞懸液。

    在細(xì)胞計(jì)數(shù)后，按照適當(dāng)?shù)谋壤龑⒓?xì)胞懸液接種到新的培養(yǎng)瓶中，注意控制細(xì)胞密度，避免過(guò)密導(dǎo)致生長(zhǎng)抑制或過(guò)疏影響細(xì)胞間的相互作用。接種后，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使細(xì)胞均勻分布，并置于37°C、含5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

    此外，對(duì)于MKN-45細(xì)胞系的長(zhǎng)期保存，可采用液氮凍存法。在細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，進(jìn)行凍存前處理，包括消化、離心收集細(xì)胞，并使用含有DMSO的凍存液重懸細(xì)胞。隨后，將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，按照梯度降溫的方式逐步放入4°C、-20°C、-80°C冰箱，最終轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。

   通過(guò)上述細(xì)致的操作步驟，我們可以有效維持MKN-45細(xì)胞的活性與穩(wěn)定性，為后續(xù)的科學(xué)研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)材料。